时间:2014-02-21 来源:武汉网whw.cc 作者:whw.cc 我要纠错
细胞裂解的方式包括化学裂解法、酶裂解法和机械裂解法。化学裂解法和酶裂解法通常是比拟平和的方法,通常不会使良多的dna断裂。这两种办法(包含sds
和溶菌酶处置等)时提取以及纯化dna常用的方式。机械裂解能够均一的裂解细胞,同化学裂解比拟,机械处理存在更高更强的裂解效力跟更低的抉择性。机械处置能够更激烈的跟全面的裂解细胞,但会造成dna
的断裂。
一、机械裂解法主要有以下两中:
1、热休克法(thermal
shock),既重复冻溶法,是一种常用的机械裂解方法,通常由冷冻和解冻两局部组成(freezing
and
thawing)。原理:因为细胞内冰粒的构成和残余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞构造粉碎。冷冻通常在液氮或-20°c冰长进行,解冻可以在37、50、65
或100℃水浴中进行。热休克比化学裂解更加平和,然而很有效,有材料表明用热休克和溶菌酶与sds的方法取得了90%的细胞裂解率。
2、超声波处理(ultrasonication)既应用超声加热的办法,把细胞粉碎。但这种处理睬导致dna
的断裂,所以加热不宜过激烈,要设定好超声时光和空隙时间,个别超声时间不超过5秒,空隙时光最好大于超声时间,这些都有利于维护酶的活性。bead-beating
也是常用的机械处理方法,有报道指出bead-beating
比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好固然dna产量较高,但通常得到的dna片断较小。
二、
恒温水浴锅广泛应用于干燥,浓缩,蒸馏,浸渍化学试剂,浸渍药品和生物制剂,也可用于水浴恒温加热和其他温度试验。化学裂解和酶裂解法(在提核酸时结合应用)
重要是裂解液处理法,细。超声波细胞破碎仪是在液体中产生空化效应的多功能,多用途的仪器,性能可靠,价格实惠。胞裂解液的重要目标有以下多少种:(1)应用去污剂损坏脂质双分子层,决裂细胞;(2)溶解蛋。标准油槽用户包括军用和民用重量级计量部门,出口很多国家。白;(3)蛋白变性使其稳固;(4)克制蛋白酶活性。
主要依据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中。在提取rna或dna时,咱们主要是要充足裂解细胞,得到更多的核酸;假如咱们的目标是蛋白,那要根据蛋白的地位、特征等因素斟酌裂解液,在提取蛋白后,再依据试验须要复性蛋白等。
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